Bl анализ что это

Bl анализ что это

Микробиологическое исследование, позволяющее выявить возбудителя дифтерии (C. diphtheriae) в исследуемом биоматериале.

Синонимы русские

Посев на бациллы Леффлера, посев на BL, посев на дифтерийную палочку.

Синонимы английские

Corynebacterium diphtheriae сulture, Diphtheria сulture.

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева и носа.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Corynebacterium diphtheriae (бациллы Леффлера) – это грамположительные бактерии рода Corynebacterium, являющиеся возбудителями дифтерии и способные к выработке дифтерийного токсина. Заболевание передается воздушно-капельным путем, источником инфекции являются больные люди или бактерионосители.

Инкубационный период составляет в среднем 2-5 дней. Происходит фибринозное воспаление слизистых оболочек ротоглотки и дыхательных путей с формированием псевдомембран и с симптомами общей интоксикации.

При токсической форме дифтерии также может поражаться сердце и нервная система. В некоторых случаях возможно бессимптомное носительство.

Диагноз «дифтерия» основывается на клинических данных, посев на дифтерию проводится для подтверждения.

Для чего используется исследование?

• Для подтверждения диагноза «дифтерия».
• Для дифференциальной диагностики заболеваний, протекающих со сходными симптомами, таких как ангины различного происхождения, паратонзиллярный абсцесс, инфекционный мононуклеоз, острый ларинготрахеит, эпиглоттит, бронхиальная астма.
• Чтобы оценить эффективность проводимой антибактерильной терапии.

Когда назначается исследование?

• При подозрении на дифтерию.
• Когда известно, что пациент контактировал с больными дифтерией.
• После проведения антибактериальной терапии – не менее чем через 2 недели после окончания курса антибиотиков.
• В некоторых случаях перед госпитализацией в стационар (с профилактической целью).

Что означают результаты?

Референсные значения: нет роста.

Выявление возбудителя дифтерии подтверждает диагноз «дифтерия» или, если симптомы заболевания отсутствуют, свидетельствует о бактерионосительстве. При отрицательном результате посева у больного с подозрением на дифтерию диагноз может быть подтвержден в том случае, когда у контактных лиц результат посева положительный, то есть выделяется возбудитель дифтерии.

Причины положительного результата

• Дифтерия или бессимптомное носительство C. diphtheriae.

Причины отрицательного результата

• Отсутствие дифтерии. Исключение составляют случаи, когда на момент исследования проводилось лечение антибиотиками.

Что может влиять на результат?

• Предшествующая антибактериальная терапия.

Важные замечания

Диагноз «дифтерия» основывается на клинической картине заболевания, поэтому лечение должно быть начато до получения лабораторного подтверждения заболевания. При положительном результате посева необходимо исследовать выделенный штамм С. diphtheriae на токсигенность.

Взятие мазков из зева и носа на BL

Правильный забор материала для исследования включает отдельные мазки из зева и носа. Каждый мазок собирают специальной тонкой петлей из проволоки, обернутой стерильной ватой.

Для забора материала из носа пациенту вводят петлю сначала в одну ноздрю, а затем в другую, примерно на 10 – 20 мм, и аккуратно проводят по слизистой носовых проходов.

Для выявления дифтерийной палочки петлю с материалом для анализа погружают в сухую стерильную пробирку и доставляют в лабораторию в течение 3 часов.

Если же транспортировка до лаборатории занимает больше времени, то петли с материалом для анализа погружают в раствор глицерина для консервации.

Перед проведением процедуры пациенту рекомендуется прочистить полость носа (высморкаться) без применения дополнительных средств, растворов или медикаментов.

Для забора мазка на БЛ из зева врачу потребуется специальная проволочная петля со стерильной ватой и стерильный шпатель (чаще всего одноразовый).

Врач шпателем прижимает корень языка больного, чтобы петля для забора не касалась слизистой ротовой полости, особенно языка.

Затем аккуратно проводит петлей с ватой по небным дужкам, миндалинам и задней стенке ротоглотки.

Наиболее достоверным считается мазок, взятый с границы воспаленных и здоровых тканей, возле очагов налета – именно в этих областях скапливается максимальное количество болезнетворных бактерий.

Так же, как и материал при мазке из носовой полости, шпатель с полученным материалом помещают в сухую стерильную пробирку или раствор глицерина.

Перед проведением процедуры больному рекомендуется избегать применения противомикробных или антибактериальных препаратов (пастилок, ингаляторов, растворов, травяных отваров и пр.)

Минимум за 2 часа до забора материала необходимо отказаться от употребления пищи и жидкостей, не чистить зубы и не полоскать горло.

Расшифровка результатов

Мазок из зева и носа на BL транспортируют в лабораторию, где проводят «посев» – полученный биоматериал помещают в различные питательные среды для выявления наличия возбудителей тех или иных заболеваний.

Если слизь из носовой области и гортани была транспортирована в сухой пробирке, то результаты анализа будут готовы через 1-2 дня.

Если же пришлось помещать пробу в консервант (раствор глицерина), то результатов теста придется ждать немного дольше, обычно 2 – 4 суток.

Если по результатам анализа вам выдают результат «нет роста» – это означает, что бактерий БЛ не обнаружено. В большинстве случаев если бактерии в мазке не присутствуют, то заражения дифтерией нет.

Исключение составляют случаи, когда больной находится или недавно завершил курс антибактериальной терапии – в таком случае, возможно, потребуется сдать мазок повторно.

Если же у больного не обнаружено роста БЛ, но у кого-то из членов семьи результаты анализа положительные, то диагноз «дифтерия» подтверждается.

Мазок на BL может дать положительные результаты и у человека, не проявляющего никаких внешних симптомов заболевания (нет боли в горле, воспаления, налета, повышения температуры).

Такой пациент считается носителем дифтерии, хотя сам активно заболевание не переносит. Как правило, врач порекомендует дальнейшие действия: антибактериальную терапию или временную изоляцию, чтобы предотвратить заражение других.

Соскоб на коринебактерии дифтерии

Соскоб на дифтерию (Corynebacterium diphtheriae) методом ПЦР

Полимеразная цепная реакция на Corynebacterium diphtheriae соскоба из зева, носа, миндалин, направлена на обнаружение ДНК дифтерийной палочки. Даже если в соскоб попадает часть бактерии, или хотя бы одна палочка, этого достаточно для положительного результата ПЦР. Данный высокочувствительный метод позволяет выявить патологию даже на самых начальных этапах развития заболевания, без клинических проявлений.

Дифтерия относится к инфекционным заболеваниям, которые вызываются токсигенными штаммами коринебактерии дифтерии. Болезнь сопровождается изменениями на слизистых оболочках ротоглотки с образованием плотных фибриновых плёнок, поражением нервной ткани и сердечно-сосудистой системы.

Подготовка к исследованию:

• Перед сдачей анализа нельзя пить, полоскать горло и чистить зубы
• Пациенту следует объяснить, что анализ производится с целью идентификации возбудителя или бациллоносительства
• Желательно не курить в день обследования

Тип биоматериала: соскоб со слизистой зева, ротоглотки, носа

Синонимы (rus): ПЦР на бациллы Лефлера,ПЦР на Bl

Синонимы (eng): Corynebacterim diphtheria,DNA(PCR),qualitative, saliva

Методы: полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией

Единицы измерения: Обнаружение или отсутствие ДНК герпесовируса

Сроки выполнения: 1 день

Процесс забора соскоба на Corynebacterium diphtheriae

• Пациент находится в положении сидя с откинутой назад головой и открытым ртом.
• Сначала производят осмотр слизистых при хорошем освещении, используя шпатель.
• Небные миндалины и участки с налётом протирают чистым стерильным тампоном.
• Зондом производят соскоб с видоизмененных оболочек. Не прикосаясь к языку и зубам, аккуратно переносят в пробирку типа «Эппендорф», закрывают пробирку притртой крышкой и маркируют её. В лабораторию материал транспортируется при температуре не выше 80С.
• Соскоб подлежит исследованию в ближайшие 24 часа.
• Врачом в направлении указываются антибиотики, применяемые до взятия биоматериала.

Виды исследования на дифтерию

Как разновидность существуют тест-системы для определения штаммов со своими наборами реагентов для выделения ДНК бактерии. Метод ПЦР осуществляется только в лаборатории, в которой имеется вся база данных геномов инфекционных возбудителей.

Расшифровка анализа на коринебактерии дифтерии

При наличии носительства или развития заболевания — результат положительный.

У здоровых людей ПЦР на Corynebacterium diphtheriae — отрицательная.

Если забор произведен неправильно, не соблюдены правила асептики и материал подвергся загрязнению, возможен ложноположительный результат.

Неправильная транспортировка и хранение материала могут дать ложноположительный результат В этом случае анализ следует пересдать.

Анализ мазка на стафилококк

Мазок для исследования клеточного состава на слизистой оболочке ротоглотки позволяет подтвердить наличие болезнетворных микроорганизмов. На основании результатов анализа врач диагностирует заболевание, назначает лекарственные средства для борьбы с возбудителем.

Содержание статьи

Одним из наиболее часто проводимых исследований является мазок из зева на стафилококк.

• с профилактической целью перед трудоустройством в пищевую промышленность, учебные и лечебные учреждения. На основании результатов определяется, здоров ли человек, можно ли начинать работу.
• беременным женщинам для установления риска развития тяжелых инфекционных заболеваний, которые могут осложнить течение беременности и оказать негативное воздействие на плод.
• для профилактического обследования ребенка перед посещением учебного учреждения во избежание развития эпидемии инфекционной болезни в детском коллективе.
• обследование пациента перед госпитализацией, а также перед операцией, так как патогенные микроорганизмы могут существенно осложнить течение послеоперационного периода и замедлить процесс выздоровления.
• установления риска развития заболевания после контакта с больным человеком, что позволяет предупредить дальнейшее распространение инфекции.
• для диагностики ЛОР-заболеваний, определения вида микрофлоры, на основании чего удается правильно подобрать лекарственные средства.

Подготовка к диагностике

Достоверные результаты исследования можно получить лишь при соблюдении определенных правил. Пациенту необходимо начинать подготовку к анализу за несколько дней. Мазок из горла покажет истинный качественный и количественный состав микроорганизмов при некоторых условиях:

• за 4 дня до анализа запрещается использовать антисептические растворы для полоскания ротоглотки, а также мази, спреи с противомикробным действием. Они приводят к смыванию патогенных микроорганизмов, уменьшая их численность. Таким образом, результаты обследования не считаются верными.
• за 3 часа до диагностики не следует принимать пищу, жидкость, жевать жвачку.
• в день сдачи материала не нужно чистить зубы;
• антибактериальные препараты для внутреннего приема отменяются за неделю до обследования.

Особенности процедуры

Пациент располагается на кушетке в положении сидя. Рот необходимо максимально раскрыть для четкой визуализации структур полости. Для улучшения положения рекомендуется несколько запрокинуть голову назад.

Специалист фиксирует язык с помощью шпателя (металлический, деревянный), опуская его ко дну ротовой полости. Стерильным ватным тампоном на удлиненной металлической петле следует провести по поверхности слизистой оболочки зева.

Тампон не должен соприкасаться с другими поверхностями при введении и выведении его из полости рта во избежание получения недостоверных данных.

Процесс сбора материала не доставляет болезненных ощущений пациенту, возможен лишь небольшой дискомфорт. У людей с выраженным рвотным рефлексом могут наблюдаться неприятные ощущения при прикосновении к задней глоточной стенке.

Собранный материал на тампоне помещается в стерильную колбу со средой, которая обеспечивает максимально благоприятные условия для сохранения патогенных микробов. Это дает возможность транспортировать материал в лабораторию без погибших микроорганизмов.

В условиях лаборатории материал помещается в питательные среды различного состава для активации процессов размножения и роста инфекционных возбудителей. В зависимости от реакции, которую следует оценить через определенный период времени.

Результаты анализа

Чтобы специалист правильно расшифровал полученные результаты, он используется таблицы показателей нормального количественного и качественного состава микрофлоры слизистой оболочки ротоглотки. На бланке указывается вид микроорганизмов, их количество, которое указывается в колониеобразующих единицах.

Для определения КОЕ используется специальная питательная среда, благодаря которым наблюдается рост определенного вида патогенных возбудителей. Колонии микробов вырастают в форме пятен. При необходимости из колонии можно вырастить новых инфекционных возбудителей.

На следующем этапе осуществляется подсчет микроорганизмов с помощью специальных методик. В случае серийного разведения набранный материал подвергается 10-кратному разведению, после чего он помещается во вторую пробирку. Далее разведенный материал объемом 10 мл снова разбавляется в 10 раз, помещается в третью пробирку. Специалист повторяет манипуляцию около 10 раз.

Из каждой пробирки часть материала высеивается на питательную среду. Этого необходимо для облегчения процесса роста микробов. При максимальной концентрации возбудителей рост практически отсутствует. Расшифровка подобного анализа не считается достоверной.

В таблице указывается вид инфекционных микроорганизмов, их количество. При нормальных условиях на слизистой оболочке ротоглотки можно обнаружить эпидермальные, зеленящиеся стафилококковые, пневмококковые микробы, небольшая часть грибков Кандида, непатогенные нейссерии.

Из болезнетворных микробов в мазках могут выявляться стрептококки, грибки, бацилла Леффлера, возбудитель коклюша и другие.

Стрептококки являются причиной множества заболеваний, например, ангины, пневмонии, ревматизма, скарлатины. Подробнее остановимся на стафилококковой и дифтерийной палочках, так как они чаще всего обнаруживаются в материале.

Стафилококковый возбудитель

Зачастую стафилококк в мазках из ротоглотки обнаруживается после сильного переохлаждения, иммунодефиците на фоне авитаминоза, простуды. Стафилококк относится к возбудителям, которые в норме присутствуют в микрофлоре, однако они не вызывают болезни. Однако при воздействии благоприятных для них факторов, они активизируются. Стафилококки передаются через зараженные предметы обихода, а также попадают в организм посредством респираторной системы при вдыхании инфекции. В редких случаях регистрируется алиментарное заражение.

Не стоит пугаться, если у новорожденного будет обнаружен стафилококк, ведь младенец обладает слабой иммунной защитой, поэтому имеет высокий риск заражения.

В диагностический комплекс входит обязательный посев или баканализ. В зависимости от количественного состава высеянного возбудителя врач принимает решение о назначении лекарственных препаратов. Стафилококки провоцирует развитие:

• воспаления носо-/ротоглотки;
• пищевой токсикоинфекции;
• остеомиелита;
• пневмонии;
• пиодермии.

Стафилококк может приводить к сепсису, что критически отягощает течение хронических заболеваний.

Стафилококк в мазке из зева может выявляться с помощью микроскопического метода путем окрашивания материала по Грамму. При диагностике обнаруживаются кокки (шаровидной формы) поодиночке или скоплениями. Стафилококк окрашивается в синий цвет. Для него характерна неподвижность и сферическая форма. Микроскопия проводится для предварительной диагностики.

Чтобы точно установить состав флоры, используется культуральный метод. Посев материала помогает вывести чистую культуру, что подтверждает диагноз и помогает установить ответную реакцию на антибиотики. Оптимальная температура для роста бактерий составляет 30-36 градусов. Стафилококки не прихотливы к питательным средам, поєтому рост их колоний возможен на различных средах:

• мясопептидный агар, на котором микробы растут гладкими и блестящими колониями округлой формы, возвышающие над средой. Золотистый стафилококк имеет золотистую окраску колоний, что обусловлено присутствием пигмента. Он выделяется при росте бактерий, отчего получил свое название.
• мясопептидный бульон. Стафилококк приводит к его помутнению и формированию осадка на дне.
• солевой агар содержит до 10% хлорида натрия. На данной среде растет исключительно стафилококковый возбудитель, так как другие микроорганизмы не выдерживают такую высокую концентрацию солей.
• кровяной агар. Вокруг стафилококковых колоний наблюдается зона гемолиза, где располагаются разрушенные эритроциты под действием гемолизина.

Для определения чувствительности микробов к антибактериальным препаратам требуется антибиотикограмма. Для этого необходимо произвести посев бактерий на твердую среду, после чего на ее поверхность располагаются диски, пропитанные разными антибактериальными средствами.

Если рост патогенных микроорганизмов угнетается под определенным диском с антибиотиком, подтверждается его эффективность в борьбе с возбудителем. В результате этого врач выбирает данный препарат для лечения заболевания. В большинстве случаев для гибели стафилококков назначаются пенициллины или ванкомицин.

Вследствие длительного использования пенициллинов для лечения стафилококковых болезней, у микробов выработалась устойчивость. Защита от антибиотика обеспечивается пенициллиназой, которая его расщепляет.

Бацилла Леффлера

Подозрение на активацию дифтерийной бактерии появляется при наличии:

• синдрома интоксикации;
• воспалительного очага в ротоглотке;
• нарушения дыхания, одышки, приступов удушья;
• дисфункции почек;
• пленочного налета на миндалинах, носу;
• кардиальной патологии.

Дифтерия – серьезное заболевание, при отсутствии лечения которого возможен летальный исход. В связи с высоким риском развития тяжелых осложнений, специально была разработана вакцина. Первая прививка проводится в 3-месячном возрасте, после дважды требуется повторное введение через 6 недель. Ревакцинация выполняется в 1,5 года, 6-летнем возрасте, после этого спустя 8 и 4 года.

Если контакт ребенка с больным дифтерией человеком произошел до момента окончания полной вакцинации, ему выполняется реакцию Шика. Если у ребенка, выполнив, мазок из зева на дифтерию bl, результат положительный, его необходимо изолировать от других детей до полного выздоровления.

Кроме того, в учебной группе, где находился больно ребенок, следует с профилактической целью обследовать всех детей. Им также берется мазок из ротоглотки для выявления возбудителя. Все предметы мебели, игрушки подвергаются дезинфекции.

Специалисты выделяют несколько видов палочки Леффлера. Так, различают mitis, gravis, а также intermedius. Они передаются при разговоре, дыхании, оседая на слизистые оболочки респираторных органов, или распространяются через предметы.

Благодаря анализу, при котором исследуется материал из ротоглотки, специалист обнаруживает возбудителя и устанавливает его штамм. От этого зависит агрессивность инфекции и соответственно, тяжесть заболевания. Классифицируются бактериальные агенты на основании ферментативных, культуральных и структурных особенностей.

Микроскопический анализ необходим для предварительного исследования материала. Морфологические признаки микроба настолько разнообразны, что требуется дальнейший бакпосев. Для окраски используются несколько методик (Грамма, Нейссера, а также Леффлера):

• метод Грамма дает возможность установить способность бактерии взаимодействовать с генцианвиолетом. Несмотря на то, что дифтерийный возбудитель относится к грамположительным микроорганизмам, это свойство взаимодействия непостоянно. Свойства микроба резко изменяются при отсутствии питания и при контакте с антибактериальными средствами.
• метод Нейссера – наиболее информативный, однако трудоемкий. Для окраски используется уксуснокислая синька, растворы Люголя и хризоидина. После нанесения синьки и Люголя препарат ополаскивается дистиллированной водой, после чего материал окрашивается хризоидином.
• Метод Леффлера используется чаще всего. Для окрашивания применяется синька (метиленовая щелочная).

В процессе диагностики важно отличить истинные дифтерийные бациллы с палочками Гофмана и Ксероза. В мазках после окраски дифтерийные микробы располагаются в виде римской цифры 5.

Для проведения бактериологического метода необходимо тщательно подбирать питательную среду, так как бациллы очень прихотливые. Для посева используются такие питательные среды:

• свернутая сыворотка Ру, на котрой бациллы вырастают шероховатыми, R-формой;
• теллуритовые дифсреды;
• сывороточно-/кровяно-теллуритовые агары;
• среда Клаубера;
• хинозольная среда Бучина.

Благодаря теллуритовым средам удается не только выявить возбудителя, но и провести дифференцировку между штаммов:

• дифтерийная палочка серая, розеткообразная;
• mitis – черной окраски, неблестящие, с гладкой поверхностью;
• gravis – с радиальностью;
• intermedius – серо-черного оттенка, с гладкой поверхностью;
• ложнодифтерийные микробы Гофмана – серой окраски, с блестящей поверхностью, конусовидные, возвышающиеся над средой;
• дифтероиды Ксероза – серо-черные, отличить их удается с помощью хинозольной среды, где они вырастают бесцветными.

Диагноз инфекционного заболевания подтверждается на основании результатов лабораторной и инструментальной диагностики. Кроме того, необходимо обращать внимание на выраженность клинических симптомов. Помимо бакпосева и микроскопии целесообразно проведение серологического исследования. Благодаря комплексному обследованию врачу удается максимально точно установить вид инфекционного возбудителя. Это дает возможность точно подобрать лекарственные препараты и предупредит развитие тяжелых осложнений.